如何選擇嵌入皿小室產(chǎn)品的孔徑?
首先需要明確您所進行的應(yīng)用是否需要細胞穿過小室膜上的孔。一般來說,共培養(yǎng)實驗、Caco-2 Transport實驗及構(gòu)建細胞極化模型等不需要細胞穿膜,大多選擇0.4μm或1.0μm等小孔徑的產(chǎn)品。而在細胞遷移實驗及侵襲實驗中,細胞則需要穿過上室的膜、到達膜的背側(cè)(少數(shù)情況下會落至下室中,如懸浮細胞的遷移/侵襲實驗),因此需要選擇較大孔徑,(如腫瘤細胞的遷移、侵襲實驗常選擇8μm孔徑的產(chǎn)品)。
如何挑選小室膜的材質(zhì)?
潔特小室有聚碳酸酯(Polycarbonate, PC),聚酯(Polyesteror PolyethyleneTerephthalate,PET)兩種膜材質(zhì)。
PC和PET膜材質(zhì)應(yīng)用都很廣泛,二者的主要區(qū)別在光透性方面,即PC膜半透明,不太方便在培養(yǎng)的過程中觀察上室細胞的形態(tài);PET膜透明,方便在相差顯微鏡下觀察細胞的狀態(tài)。
另外,在0.4μm孔徑下,PC膜和PET膜的孔密度(單位面積上的孔數(shù)量)不同,PC膜提供更高的膜孔密度。您可根據(jù)對實驗的要求(是否需要觀察細胞狀態(tài),是否需要更高孔密度的膜)來選擇。
小室的膜材質(zhì)與細胞培養(yǎng)皿/瓶不同,細胞貼壁情況會有什么差異嗎?
未包被的小室膜材質(zhì)(PC或PET)雖與普通塑料細胞培養(yǎng)皿/瓶的材質(zhì)(Polystyrene, PS)不同,但膜的兩側(cè)均經(jīng)過組織培養(yǎng)表面處理(TissueCulture Treated, TC Treated),與一般做細胞培養(yǎng)的PS耗材的表面處理相同。因此,在正常情況下,細胞在小室內(nèi)的貼壁情況應(yīng)與培養(yǎng)皿/瓶中類似。在普通培養(yǎng)時需包被基質(zhì)蛋白等輔助貼壁的細胞,在小室上仍然需要包被。包被方法類似普通培養(yǎng)表面,可通過小室膜表面積換算所需包被液的量
小室產(chǎn)品可否滅菌后重復(fù)使用?
小室產(chǎn)品為一次性使用的耗材,不可重復(fù)使用。小室的孔板和膜的材質(zhì)均無法承受高壓蒸汽滅菌,且無法確認(rèn)重復(fù)使用的小室是否被徹底清潔,因此無法保障重復(fù)使用的實驗效果。
嵌入皿小室是否需要匹配特殊的接收板/下室產(chǎn)品?
與相應(yīng)規(guī)格的普通細胞培養(yǎng)多孔板(如TCP010006、TCP010012、TCP010024等)適配。
在接種細胞前,是否需要進行“水化”?
大多數(shù)應(yīng)用并不需要額外進行“水化”操作,該操作主要用于Matrigel預(yù)包被的侵襲小室,在使用前需平衡至室溫,并加入預(yù)溫至37攝氏度的無血清培養(yǎng)基,于培養(yǎng)箱中水化兩小時。
少數(shù)情況下,提前在上下室加入培養(yǎng)基,并在培養(yǎng)箱中預(yù)孵育大于1小時可幫助細胞貼壁,但大多數(shù)細胞可以直接接種。
接種細胞的加液順序如何?
一般先將預(yù)熱的培養(yǎng)基加入多孔板的孔中(下室),再輕輕將小室放入孔中。在放入時,建議將小室稍稍傾斜,一側(cè)先接觸液面,以免垂直放入在小室下生成氣泡。之后便可將混合均勻的細胞懸液加入小室內(nèi)部。
小室膜上既然有許多小孔,在包被基質(zhì)蛋白或一些單獨加液在上室的情況下,液體是否會很快漏至下室?
一般不會。小室的膜上的小孔孔徑有限,在表面張力的作用下,加入上室的包被液并不會很快漏下,如果短時間內(nèi)發(fā)現(xiàn)有液體大量滴下,需檢查小室的膜是否有裂痕或不完整的情況。
共培養(yǎng)實驗中,上下室接種細胞的位置一般如何安排?
由于小室膜上小孔的存在,上下室的培養(yǎng)基可以交流互通,接種在上下室的細胞是相互影響的。接種細胞的位置安排需考慮收集細胞、進行下游檢測的方便程度,同時也需要考慮到上下室培養(yǎng)面積的差異(上室的有效生長面積比下室小,相應(yīng)地,接種的細胞量恐怕有差異),您可參考相關(guān)文獻或進行預(yù)實驗來最終決定實驗安排。
小室內(nèi)接種的細胞可否消化收集?
可以的。您可采用在普通培養(yǎng)器皿中消化相應(yīng)細胞的試劑(如胰酶等),在上下室均加入推薦體積的消化液。
對小室內(nèi)接種的細胞進行藥物處理時,藥物是僅需加入上室嗎?
由于小室膜上小孔的存在,我們建議您在上下室內(nèi)均加入含有同樣濃度藥物的培養(yǎng)基,以確保您的藥物處理濃度。